一个完整的PCR扩增体系主要由引物、酶、dNTP、模板和Mg2+等基本要素所组成。
引物设计的原则 引物不但决定了PCR扩增片段的长短，也是PCR扩增特异性的关键，已知一段序列怎么设计引物，要保证PCR扩增的特异性，引物一定要与模板DNA具有完全的互补性。
引物设计的原则 引物不但决定了PCR扩增片段的长短，也是PCR扩增特异性的关键，要保证PCR扩增的特异性，引物一定要与模板DNA具有完全的互补性。
1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。2、引物长度一般在15-30碱基之间。3、引物GC含量在40%-60%之间，Tm值最好接近72℃。4、引物3′端要避开密码子的第3位。5、引物3′端不能选择A，最好选择T。6、碱基要随机分。
一、引物设计的一般原则
引物长度以18~30bp为宜，以20bp左右最为常用。
一、引物设计有3条基本原则：1、引物与模板的序列要紧密互补。2、引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。3、再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。二、PCR引物设计的目的是找到一对合适的。
引物过短，易导致非特异扩增。
较长的引物虽特异性好，但在引物内易形成二级结构，如发夹环， 1. 引物扩增跨度(扩增片段长短): 扩增片段在普通PCR以200~500bp为宜 特定条件下可扩增长至10kb的片段 实时荧光PCR则为70~ 150bp
要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构.如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它.如这一段不能形成二级结构,那就可以在这一区域设计引物.现在可以在这一保守区域里设计一对引。
2.引物 G +C比例及碱基:
至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3’的下降形状也有利于引物与模板的结合；4、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3’端的互补重叠。
G+C含量以140%~60%为官，G+C比例太低扩增效果不佳，G+C比例过高易出现非特异条带。
此外，ATGC最好随机分布.避免出现重复的基序。
引物设计有 3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。具体实现这 3 条基本原则需要考虑到诸多因素，如。
3.引物的熔解温度(Tm):
好啦，今天先给大家介绍以上三点引物设计的一般原则，还有6大原则，关注我，下期告诉你~
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