关键质量属性[1]（critical quality attributes，CQAs）最初由《人用药物注册技术要求国际协调委员会药物研发指导原则》（ICH Q8 R2）提出，是指在适当的限度、范围或分布之内的与产品质量密切相关的物理、化学、生物或微生物性质或特征，用以确保产品的质量。由于经方制剂的最终质量受到“药材、饮片、基准样品及制剂”等多个环节的共同影响，而每个环节都存在与制剂质量密切相关的“物理、化学、生物或微生物”3个层面的性质或特征。
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1 经典名方的CQAs
目前报道的经典名方CQAs研究，主要是对药材-饮片-中间体-物质基准传递过程中的“特征图谱、指标成分含量、出膏率”等指标进行测定，确定经典名方的CQAs及其量值波动范围，这为经方的制剂开发及质量控制奠定了基础。但研究主要集中在经方的化学质量特性，而“物理、生物或微生物”特征以及体现中医药整体辨证特性的CQAs相对较少。因此，在药材、饮片、基准样品、制剂研发各环节中存在的一些具有中医药特色的“物理、化学、生物或微生物”CQAs值得广泛关注。
1.1 药材与饮片的CQAs
药材与饮片是经典名方的重要原材料，优质中药材与质量合格的饮片是制剂发挥临床疗效的重要保障。目前报道的药材CQAs研究主要以指标成分、干膏率等CQAs作为评价指标，优化药材的提取工艺[3-5]。某些中药所具有的相对密度、折光率和膨胀度等特殊物理性质，生长年限、采收期等生物特性，以及酶、气味等化学特性可作为药材的潜在CQAs。
1.1.1 物理特征CQAs
1.1.2 化学特征CQAs
某些中药本身含有或经发汗后产生特定功能的酶，在进行相关药材的CQAs研究时，可以考虑将酶作为潜在CQAs，测定酶活力或含量。如：蜂蜜含有淀粉酶、转化酶等多种酶，欧洲蜂协规定光度计法测定蜂蜜中的淀粉酶值≥8[10]。药材“发汗”过程中，多酚氧化酶、过氧化物酶、水解酶等酶对药材的外观性状和内在品质产生重要影响[11]。多酚氧化酶是使地黄“发汗”后色泽和药效变化的重要酶之一[11]；酪氨酸酶能够分解厚朴苷A等苷类成分，影响厚朴中的苷类成分含量[12]。
不同中药材所含化学物质不同，具有的“气味”也不同，“气味”作为中药材的重要性状，是衡量药材品质的标准之一。对于某些气味特征突出的中药，可以考虑采用电子鼻或电子舌等人工智能感官对其“气味”特征进行定性或定量表征，作为潜在CQAs。朱广飞等[13]采用Heracles Neo超快速气相电子鼻，对不同产地的广藿香进行气味分析，获得其气味色谱信息，实现了广藿香饮片的快速鉴别。杨露萍等[14]采用电子舌技术对不同产地川芎挥发油响应值与成分含量进行相关性分析，揭示川芎挥发油中主要辛味成分及其响应敏感电极。
1.1.3 生物特征CQAs
生长年限是影响中药质量的关键时间指标之一，植物生长年限不同，其所含化合物的种类和含量通常随之发生变化，药材质量与临床疗效也会有所差别。例如：不同生长年限的黄连所含次生代谢产物的种类和含量有较大差异，5年生黄连的有效成分总量最高[15]；栽培品黄芩中黄芩苷等有效成分总量在第1～2年逐渐升高，3年后开始下降，随着生长年限增长，黄芩化学物质存在明显差异[16]；黄仕文等[17]提出不同生长年限的人参药材合格率差异较大，生长年限可作为人参的CQAs。
《中国药典》2020年版将486种植物药材的采收期纳入标准[6]，植物的生长发育阶段不同，药用部分所含有效及有害成分不同，药物的疗效和不良反应往往差异较大，采收期可成为中药材的潜在CQAs。研究表明，采收期对黄芪质量有重要影响，不同采收期黄芪的挥发性成分和无机元素含量差异显著[18-19]。不同采收期金银花所含化学成分含量差异较大，幼蕾期与三青期的药效成分含量最高[20]。
1.2 基准样品的CQAs
“经典名方物质基准”也称基准样品，是经方制剂生产工艺优化和质量评价的重要参照[21]，明确基准样品的CQAs是保证经典名方现代制剂和传统汤剂一致性的重要前提。目前已有的报道主要采用“特征图谱、指标性成分含量及出膏率”相结合的评价模式，研究“饮片到基准样品”传递过程中的“特征图谱的相似度范围及峰归属、指标性成分含量范围、转移率范围及出膏率”等内容[22-25]，确定基准样品的CQAs。其中，指标成分作为经典名方基准样品CQAs研究的主要内容，应充分体现经典名方的中医药特点，相关研究应基于药物的临床疗效，综合考虑“君臣佐使配伍原则、复方治疗病证的药效成分以及成分的毒效特点”，选择能够表征经典名方有效性与安全性的指标成分作为CQAs。
1.2.1 “君臣佐使”配伍原则
“药有个性之专长，方有合群之妙用”，经典名方中各药味遵循“君臣佐使”配伍原则，取众药和合之力以最大限度发挥疗效，从而起到防治疾病的作用。经典名方CQAs研究应遵循君臣佐使配伍原则，优先选择君药、臣药中的关键成分，充分考虑佐、使药中的有效成分，综合确定CQAs。例如：桑白皮苷A是泻白散中君药桑白皮的主要药效成分，考虑处方的君臣佐使配伍，王彦等[26]在对泻白散物质基准的研究中，将桑白皮苷A确定为泻白散的CQAs；大黄与桃仁是桃核承气汤的君药，但二者的处方剂量相差4倍，导致各成分峰面积差异巨大，为了更全面地反映君药等重要药味的化学信息，关雅戈等[27]建立了2张特征图谱明确桃核承气汤的CQAs。
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1.2.2 功效相关的药效成分
“法随证立、方从法出”，辨证论治是中医临床诊治疾病的根本原则和基本特点，机体所处的疾病状态不同，药物作用于机体产生的药效作用不同，同一方剂用于治疗不同疾病，表达的药效物质也有差异[28]。经典名方CQAs研究应以经方辨证论治特点为根据，关注经方治疗不同病证的药效成分。化肝煎临床多用于治疗各类胃炎，聂欣等[29]采用血清药物化学结合网络药理学的研究方法，得到其与主要临床适应证密切相关的核心功效成分并结合文献研究，辨识化肝煎治疗胃炎的CQAs。当归四逆汤是治疗血虚寒厥证的经典方剂，许金国等[30]选择与该方主治病证相关的阿魏酸、桂皮醛、肉桂酸等7个药效成分作为该方的CQAs。只有方剂功效与病证相符，才能邪去正复，因此应结合中医辨证论治特点，以临床功效为导向，研究经方治疗具体病证的药效成分，综合确认CQAs。
1.2.3 成分的不同毒效特点
1.3 制剂的CQAs
中药制剂是直接用于临床的药品，CQAs是保证制剂质量的重要指标[31]。目前经典名方制剂的CQAs研究大多关注“入血成分、功效相关成分”等化学属性[29，32]，或者以“指标成分提取率或转移率、出膏率”等作为CQAs评价提取工艺[33-35]，并未有报道研究具有制剂特征的CQAs。剂型作为给药的方式，与药物疗效密切相关[36]，无法体现制剂特征的CQAs难以在最终环节保证经典名方制剂的疗效。
1.3.1 物理特征CQAs
对于散剂、颗粒剂、片剂等以粉末和细颗粒为原料的固体制剂，微粉的“孔隙率、堆密度”等基本物理特性不仅对制剂的成型工艺有重要影响，而且与制剂的质量及疗效密切相关，现代研究表明，这些物理特性可以作为制剂过程中的CQAs[37]。张静等[38]基于粉体学评价方法，综合表征了53批银杏叶提取物的29个粉末物理属性，发现不同批次间的物理属性具有明显差异，银杏叶提取物的粉末物理属性可作为银杏叶制剂过程中的CQAs。
1.3.2 化学特征CQAs
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1.3.3 生物或微生物特征CQAs
生物标志物是反映治疗药物对生物体系干预效果的指标[41]，该指标既能反映药效也可反映毒性，能够在生物特征层面为经典名方CQAs研究提供指导。因此，与生物标志物关联较强的指标性成分可作为具有生物学特征的经方潜在CQAs，以反映经典名方的安全性与有效性。刘琦等[42]运用血清化学成分与代谢标记物相关性分析法，发现咖啡酸、2-羟基-1-甲氧基蒽等与男仕胶囊治疗肾阳虚证的生物标志物密切相关的8种化学成分。Zhou等[43]通过皮尔逊相关分析和典型相关分析发现乌头中的生物碱类成分与LysoPC（22∶5）、缬氨酸存在一定的相关性。此外，受多种药效成分调控且与临床疗效密切相关的下游蛋白能够控制药物质量[44]，与其密切相关的化学成分可作为制剂的潜在CQAs。
肠道菌群作为“人体第二基因组”[45-46]，对药物疗效发挥有重要影响。“微生物种类和含量”以及“与菌群密切相关的中药成分”是具有微生物特征的潜在CQAs。中药曲剂通过药物发酵制备，酵母菌、霉菌等多种微生物参与发酵[47]，“微生物种类和含量”可作为中药曲剂的CQAs。研究表明，微生物与中药曲剂的发酵程度及功能密切相关，不同曲剂的优势菌种不同。
朱海针等[48]运用PCR-变性梯度凝胶电泳技术结合非加权组平均法，发现淡豆豉发酵过程中的“黄衣上遍”与“再闷”2个阶段的微生物群落结构差异较大。王秋红等[49]对传统工艺发酵六神曲中的真菌进行分离与鉴定，发现黄曲霉菌和产黄青霉菌可能是六神曲发酵的有效菌种。此外，酶活性监测能有效评价其发酵程度[50]，越来越多的学者[50-53]建议将“酶活力”用于评价中药曲剂的质量，有报道[54]建议联合微生物构成、酶活力及化学成分含量来评价曲剂质量。
中药成分与肠道菌群发生相互作用，菌群通过产生酶及代谢产物、参与微生物群落-宿主共代谢体系等对药物疗效产生重要影响[54-56]，与菌群密切相关的中药成分可作为制剂的CQAs。相关分析法能够衡量2个变量间的相关程度，符合中医药整体观的多靶点生物体系关联分析正得到广泛的关注[57]。目前采用相关分析法将代谢产物与肠道菌群关联分析，明确二者相关性的研究已较为常见[58-61]，也有学者[62]通过相关性分析发现多花黄精内生菌群与多糖、皂苷等有效成分之间存在关联。
2 影响经典名方CQAs的重要因素
规定要求应充分考虑在药材来源、饮片炮制、制剂生产及使用等环节中影响质量的因素，确定CQAs。除了以上提到的具有明显“物理、化学、生物或微生物”特征的CQAs外，药材品种、药用部位、药材品质（产地、种植培育、产地初加工、贮藏）、中药炮制、制剂生产及临床使用等因素，虽然没有明显的“物理、化学、生物或微生物”特征，但也是影响经典名方CQAs的重要因素，见图1。
2.1 药材基原
药材基原主要包括药材品种与药用部位[63]，是影响经典名方CQAs的重要因素。规定中明确指出经典名方所用中药材的药用部位应“遵古”确定，因此本文不再重复论述。基原是保证中药制剂质量、药效及安全性的源头，也是影响经典名方CQAs的重要因素，明确药材基原已成为经典名方研究共识，CIELab色度空间技术、中药材DNA条形码分子鉴定法能够快速、准确的确定药材基原，为辨识经典名方CQAs奠定基础。CIELab色度空间技术基于色度学原理，其L*、a*、b*颜色数值能够对同一药材的不同基原进行快速鉴别[64]，并在一定程度上反映中药材质量，在确定中药基原方面有巨大优势。
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中药材DNA条形码分子鉴定法通过检测ITS2为主体的条形码序列，实现对中药材及其基原物种的快捷、准确鉴定[65]。该技术运用于中药材基原物种鉴定已较为成熟[66-69]，《中国药典》2020年版四部[70]也收载了“中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则、DNA测序技术指导原则”等相关指导原则。辛天怡等[71]将其与二维码技术相结合，建立中药材二维DNA条形码流通监管体系，能有效实现对中药材流通的数字化监管。
2.2 药材产地
中药有效成分的形成和积累与其生长环境密切相关，《神农本草经》记载：“土地所出，真伪陈新，并各有法”，不同产地出产的中药材质量差异显著，中药产地是影响经典名方CQAs的又一重要因素。现代研究表明，产地对前胡药材的质量有较大影响[72]，不同产地艾叶中主要化学成分的含量差异明显[73]。对于道地性明显的质优效佳的中药材，应选用道地产区出产的代表性药材为经方研制的原料；对于道地性不明显或无道地性的药材，应选择主产区出产的优质药材作为原料，以满足经典名方研究之“精品传承经典”的要求。
2.3 药材种植培育
目前，绝大多数常用及名贵中药材，如“附子、党参、人参、鹿茸、牛黄”等，都以人工种植（养殖）为主，这极大地缓解了中药材的供应压力，促进中药材的可持续发展，但同时也存在诸多问题。一是种子种苗的质量与生产亟待提高。种子种苗作为药材种植（养殖）的基础，直接影响药材的质量与产量[74]。目前我国的中药材种业正处于起步阶段，优质种子种苗品种较少，种子生产专业化水平不高[75]。二是种植（养殖）不规范。虽然国家药品监督管理局早在2002年就颁布了指导中药种植生产的推荐规范——《中药材生产质量管理规范（试行）》，但实际通过GAP认证的中药材较少，大部分种植（养殖）药材并未按照GAP要求进行管理，导致市场流通药材来源复杂、质量参差不齐[76]。
药材品质是中药临床疗效发挥的关键，中药材不是农产品，实际生产时应在保证临床疗效与药材质量的前提下，兼顾药材产量。以栽培药材为原料的，首先应明确种子种苗来源，鼓励选用道地产区种质或优良品种繁育的种子种苗[74]，从源头提高中药材质量；其次建议参照GAP要求进行药材生产和管理，尽量减少使用农药兽药、化肥激素，降低重金属与外源性污染风险，在生产管理过程中遵循高标准严要求；最后建立药材种植溯源系统[77]，明确种植过程中的CQAs，实现种植（养殖）全流程信息可追溯，加强质量管理，降低监管难度。
2.4 药材贮藏
贮藏是影响药材品质的关键环节，也是影响经典名方CQAs的重要因素。贮藏方法影响药材有效成分的种类与含量，从而影响其内在质量。研究表明，天麻、硫熏天麻及其饮片中的化学成分和二氧化硫残留量随贮藏时间增加而发生显著变化[78]；栀子中有效成分栀子苷的含量随贮藏时间延长而逐渐降低[79]；不同贮藏条件对红参的皂苷类成分含量影响不同，红参的适宜贮藏条件以纸箱为外包装，避光存放于−20 ℃[80]。科学合理的贮藏方法能够减少药材存放过程中发霉虫蛀、变色泛油等质量问题。因此，在进行经典名方制剂研究时，应开展相关研究，优先保证药材质量，其次考虑生产成本，综合确定药材的贮藏条件及贮藏时间，并设置对应的CQAs予以控制。史永平等[81]研究表明栀子苷可作为与贮藏时间相关的指标，反映栀子饮片的质量。
2.5 饮片炮制
中药炮制采用特殊的技艺对药材进行加工，以达增效减毒、改变药性等目的。炮制方法和炮制辅料对饮片的CQAs有重要影响。其一，中药经不同方法炮制或加工后，其所含化学成分的种类、含量及生物利用度等发生改变[82]，同一中药的不同炮制品所含化学成分不同[83]。例如：川芎生品和不同炮制程度酒炙品中所含洋川芎内酯A、阿魏酸等药效成分可作为其差异标志物[84]，川黄柏的3种炮制品中盐酸小檗碱的含量亦不相同[85]。其二，炮制辅料直接影响中药饮片质量，中药与辅料在炮制过程中发生相互作用，其性味、功效、作用趋向、归经和不良反应等方面发生变化。例如：白术经蜜麸炒后，其“燥性”减缓，而温中之效增强[86]；酒制升提，酒川芎活血行气止痛且能引药上行[87]；生半夏味辛且辣，麻舌而刺喉，经姜炮制后毒性降低，长于温中化痰和止呕降逆[88]。
目前大多数常用炮制辅料存在借用食品标准或缺乏炮制辅料标准的问题，使用频率较低的炮制辅料无质控标准[89-90]，炮制辅料标准缺乏会导致饮片质量出现波动，这不利于经方质量的稳定均一。此外，去皮、抢水洗、发汗、干燥等产地加工方式也会对药材所含化学成分产生重要影响[91-93]。然而，现今产地加工多由种植农户完成，尚无科学合理的指导原则及统一标准，产地加工后的药材成品性状差异较大，无法满足用药需求。针对上述中药质量过程控制标准缺乏的问题，应加大基础研究力度，从技术层面指导制定完善科学合理的质量标准和操作规范。对于“形色气味”等重要质量特征[94]，可考虑通过图像提取与处理技术、电子眼、电子鼻、电子舌等现代方法进行可视化处理，客观量化中药与饮片的性状特征。
2.6 基准样品的稳定性
（1）煮散与散剂的饮片粉碎粒度：目前国家中医药管理局发布的27首煮散与散剂经方[95-96]对饮片粒度仅记载为“㕮咀、为末、下筛”等，饮片粉碎粒度未有明确规定的问题普遍存在。中药饮片粉碎粒度影响药效成分溶解程度与溶出速度[97-98]，在煮散与散剂经典名方CQAs研究中，应该以功效为导向，结合文献考证与现代研究结果，综合确定饮片粉碎粒度，保证基准样品质量。
（2）基准样品的实物形态：适宜的“实物形态”是保证研究期间基准样品稳定、均一的重要因素，丸散膏剂保存不当容易吸潮，致使基准样品质量出现波动。有研究采用煎煮法制备冻干粉作为散剂基准样品[99]，也有学者[100]先遵古制备散剂，再提取制样表征其化学特征。笔者认为可对2种制备方法进行对比研究，从浸出物、出膏率、指标成分、特征图谱等方面综合评判，力求在最大限度上“遵古”制剂，同时结合现代研究实际，制备能够体现经方特点的基准样品用于CQAs研究。
（3）基准样品的复溶溶剂：合理选择复溶溶剂能够在最大程度上实现经方基准样品制备前后的一致性，保证特征图谱的完整性以及指标性成分的准确可测性。汤剂以水为媒，遵古应以水为复溶溶剂，但水溶样品杂质较多，容易损伤色谱柱，实际研究中应对基准样品的复溶溶剂进行考察。研究表明，50%甲醇对半夏厚朴汤[101]等经方基准样品的溶解效果较好。
2.7 制剂辅料与药物剂型
制剂是经典名方的临床用药形式，其质量受制剂处方、制剂原辅料、药物剂型等多种因素影响。药用辅料不仅与药物的成型性、稳定性密切相关，对药物的安全性和有效性也具有重要影响[102]。例如，适宜的辅料能够加快六味地黄丸（浓缩丸）崩解，最大限度发挥药物疗效[103]。因此，对制剂质量与疗效产生重要影响的药用辅料应设置CQAs予以控制。
此外，由于不同剂型的辅料及制备工艺不同，使得中药所含成分的种类、含量、释药特点以及生物利用度等发生明显变化，最终影响中药产品质量和临床疗效。《中国药典》2020年版“制剂通则”对不同制剂的关键质控指标做了相关规定，但部分上市药物的现行质量标准无法体现其剂型特征。例如：治疗脾肾阳虚证的经典名方附子理中丸有“大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、浓缩丸”等多种剂型，甘嘉荷[104]研究表明附子理中丸大蜜丸、水蜜丸、浓缩丸的药效成分含量与体内药动学过程有所差异。然而不同剂型附子理中丸的现行质量标准大多类似，含量测定仅选择佐使药甘草所含成分甘草苷作为指标成分，无法体现剂型特征的单一质控指标不利于高品质经典名方制剂的研究与发展。
3 结语与展望
经方源于经典，用于临床，安全有效是经典名方制剂的基本要求。其一，经方制剂经过几千年的临床应用，安全性已毋庸置疑，但某些复方或复方中的药味，在现代临床应用中，仍容易因个体差异、不合理使用等原因造成安全性问题[105-107]，某些传统意义上认为无毒的中药，如“何首乌、大黄、三七、补骨脂”等在使用过程中也被报道出现了“肝肾毒性”等新的不良反应[108]。
因此，经方制剂的安全性监测应贯穿于药品研发与临床使用全过程，经方的CQAs应随现代研究与临床反馈的增加而不断更新。其二，指标成分作为反映药物有效性的重要标准，是经方CQAs研究的重要内容，对保证经方制剂疗效十分关键。但目前部分经方，如易黄汤、泻白散中君药桑白皮、山药和芡实，在《中国药典》2020年版中缺乏该类药材指标成分的含量测定标准；某些经方的指标成分因处方用量较少、性质不稳定、缺乏对照品等而无法进行准确定量。
经典名方制剂不同于化学药，中药成分复杂，作用靶点广泛，经典名方从古方到制剂，质量控制需要层层把关。经典名方CQAs贯穿于经方研制全过程，作为反映中药品质的质量属性，具有安全性与有效性等特点，是保证持续生产安全有效的优质经方制剂的关键。经典名方CQAs的研究应该以临床用药安全有效为导向，从“物理、化学、生物及微生物”方面综合考虑“药材、饮片、基准样品、制剂”各个环节中影响CQAs的重要因素，并开展相关性研究确定经方的CQAs，为经方生产过程控制和制剂质量标准建立提供依据，推动经典名方高质量发展。相信随着科学技术的不断更新，经典名方的研发难题必将迎刃而解，焕发出新的生机与活力。
利益冲突 所有作者均
来 源：杨莎莎，林 夏，黄 友，郝怡雯，张 星，周靖惟，赖文静，傅超美，章津铭，张 臻．经典名方关键质量属性及影响因素分析 [J]. 中草药，2023，54(4):1274-1284.
